Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次浮现人棒状内自身抗棒状到浮现1改型肾病病理症状的成效率在老年人时期就有更好的描绘借助于，多个人棒状内自身抗棒状阳性的老年人里有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的老年人这一%提高到84%。相比之下，占病理1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的胃癌机制还没想得到充分的数据分析。

越来越多的人开始用到仍须系统来度量1改型肾病的成效：族裔在浮现多种人棒状内自身抗棒状时进入第1阶段，浮现血糖间歇性时进入第2阶段，浮现症状时进入第3阶段。一些多发人棒状内自身抗棒状阳性的族裔，在1期和2期，成效较慢，并发展为胃癌的1改型肾病。我们在此之后描绘借助于了一小组在首次样品到多种人棒状内自身抗棒状抽样后多于10年无肾病的极慢成效者，这小组病征人数少，但不尽相同之处颇为明确。随后，我们发现人棒状内自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞核里间棒状在成效比较慢的病征里基本不共存，但在现阶段胃癌和肇因的肾病病征里很容易样品到。这可能会表明，与成效病征相比，这些病征自身免疫里间棒状的适度增强。

早期数据分析表明，尽管适度性T细胞核(Treg)数目正常，但肾病病征共存一些功能缺点，其里以外对IL-2的里间棒状并能降低。此外，肾病病征里的震荡CD4+T细胞核可能会对适度更加具抵抗性，表现为震荡T细胞核的可抑制减弱，自然消除的Treg和排泄消除的诱发Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞核里IL-2里间棒状减弱。本数据分析的目的是描绘借助于了CD4+适度性T细胞核(Treg)在一小群极比较慢成效者里的不尽相同之处，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群系统化的纵向数据分析，在21岁以下胃癌的病征亲属里检查1改型肾病的危险因素。我们在此之后描绘借助于了曾一度比较慢成效者的不尽相同之处，他们持续保持多重人棒状内自身抗棒状阳性将近10年，但没浮现肾病的病理症状，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名暂时持续保持无肾病并愿意提供大量血液抽样的比较慢成效者纳入T和B细胞核功能分析方法。在在此在此之后的数据分析里，8名慢成效者(SP小组)，里位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人棒状内自身抗棒状阳性。所有的旁观者都位处1改型肾病成效的1期，尽管一些人随后失去了人棒状内自身抗棒状对某些淋巴细胞的阳性里间棒状，然而，一名病征已经位处2期多于6年，但没浮现病理症状，一名病征被诊断为肾病，该受试者72岁，在挖掘实验抽样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里对该ADP开展了除此以外审核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多匹配流式细胞核法术和T细胞核可抑制实验审核ADP里Treg的频率、表改型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)开展无统筹聚类分析方法，审核Treg表改型。

结果：与心理健康ADP相比，来自慢成效棒状的梦境CD4+T细胞核的统筹聚类说明了，作用于的梦境CD4+ Treg频率提高，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)传达提高有关。一名HbA1c升温的病征与成效比较慢者和匹配的印证小组相比，Treg谱相同。功能已经有，与心理健康ADP相比，来自比较慢成效棒状的Treg诱发的CD4+震荡T细胞核可抑制明显受损。表现为对震荡CD4+T细胞核CD25和CD134传达的可抑制提高。

三幅1 深入的表改型分析方法说明了，CD4+Treg流感病毒在慢成效描绘借助于符里提高。由FlowSOM转化的Treg室，围住在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标有物传达鉴定借助于10个元簇:梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个不尽相同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个链表推选一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在链表小组附近打磨。每个链表里的饼三幅回应单个标有的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以说明了整棒状标有传达。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比重元素为每个metacluster盒两条路线三幅(重元素> 0.05%)确定为HD和SP小组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞核(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞核(l)。深蓝色圆圈推选理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模改型证实，Treg频率的提高是成效比较慢的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分离，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(杂色)小组以及ADPSP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的盒两条路线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心着色，圆点引人注意的簇被标识为SP和HD描绘借助于符之间的不尽相同。(j)盒两条路线三幅说明了了在SP(杂色)和HD(灰点)小组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比重元素(%)。(k)直方三幅说明了每个簇的表改型(粉红色)和Treg标有相比传达与背景传达(金色);上列，寄存器Treg_3;比如说一路上，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇里标有的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与心理健康献血者相比，成效比较慢者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T细胞核元簇(梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个传达标有的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)描绘借助于符的传达热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有ADP以外，p< 0.05(金色)ADPSP 606和匹配的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级暂时性，从所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(深蓝色)串联，说明了直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自比较慢成效的CD4+ treg细胞核操纵震荡CD4+T细胞核的并能降低。SP小组用金色的两条路线和圆圈回应，HD小组用黑色的两条路线和圆圈回应，深蓝色的两条路线/圆圈回应ADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按捕捉到的%校准。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培育3过后开展流式细胞核法术样品。(a-d)与CD4+接收者者相比应的treg培育(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制%(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制%。用到阳性印证(作用于的响应细胞核不含treg)计算可抑制%。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T细胞核对比较慢成效的T细胞核重置的可抑制更加引人注目。SP小组用金色的两条路线和圆圈回应，HD小组用黑色的两条路线和圆圈回应，深蓝色的两条路线/圆圈回应ADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按捕捉到的%校准。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培育3过后开展流式细胞核法术(CD25反染)和细胞核因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者协力培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算借助于的结论是，来自比较慢成效子的重置梦境CD4+Treg在GITR传达里想得到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1改型肾病风险族裔里的异质性的全面性。

文中借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28