Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身免疫到用到1型号哮喘诊疗腹泻的成效亲率在儿童时期就有极好的阐述，多个肝细胞自身免疫乙型肝炎的儿童之前有70%在胰岛素转换成后10年内患上哮喘，而随访15年的儿童这一数目减低到84%。来得之下，占诊疗1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的发作必要还不能赢取充分的量化。

越来越多的人开始采用分段系统来假定1型号哮喘的成效：生物锥体在用到多种肝细胞自身免疫时带入第1收尾，用到食欲间歇性时带入第2收尾，用到腹泻时带入第3收尾。一些多发肝细胞自身免疫乙型肝炎的生物锥体，在1期和2期，成效较比速度快，并其发展为发作的1型号哮喘。我们之前阐述了一两组在首次样品到多种肝细胞自身免疫抽样后多于10年无哮喘的近于比速度快成效者，这两组腹泻人数极多，但特征非常确实。随后，我们推断出肝细胞自身抗原抗体CD8+T细胞内化学反应该在成效加速的腹泻之前基本不存在，但在最近发作和由来已久的哮喘腹泻之前很容易样品到。这可能指出，与成效腹泻来得，这些腹泻性疾病的调节加强。

早期量化指出，尽管调节性T细胞内(Treg)数目正常，但哮喘腹泻存在一些功用缺陷，其之前还包括对IL-2的化学反应该灵活性减小。此外，哮喘腹泻之前的畸变CD4+T细胞内可能对调节兼具抵抗性，显出为畸变T细胞内的抑制作用加强，自然诱发的Treg和锥体外诱发的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内之前IL-2化学反应该加强。本量化的目的是阐述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群近于加速成效者之前的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方式：BOX量化是一项以人群依此的纵向量化，在21岁以下确诊的腹泻亲属之前检查1型号哮喘的险恶考量。我们之前阐述了长期加速成效者的特征，他们保证多重肝细胞自身免疫乙型肝炎超过10年，但不能用到哮喘的诊疗腹泻，比速度快性或非顺利完成性性疾病。随后，10名暂时保证无哮喘并想提供大量肝脏抽样的加速成效者纳入T和B细胞内功用量化。在迄今为止的量化之前，8名比速度快成效者(SP两组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞自身免疫乙型肝炎。所有的大多数人都西北面1型号哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫对某些抗原的乙型肝炎化学反应该，然而，一名腹泻已经西北面2期多于6年，但不能用到诊疗腹泻，一名腹泻被治疗为哮喘，该受试者72岁，在采集科学量化抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之前对该NADPH顺利完成了实际上审核。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内心法和T细胞内抑制作用测试审核NADPH之前Treg的频亲率、环境考量和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)顺利完成无都由聚类量化，审核Treg环境考量。

结果：与身锥体健康NADPH来得，来自比速度快成效锥体的知觉CD4+T细胞内的都由聚类说明了，激来生的知觉CD4+ Treg频亲率减低，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的腹泻与成效加速者和反之亦然的对照两组来得，Treg序有所不同。功用量化指出，与身锥体健康NADPH来得，来自加速成效锥体的Treg依赖性的CD4+畸变T细胞内抑制作用明显受到影响。显出为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的抑制作用减低。

所示1 有系统的环境考量量化说明了，CD4+Treg变异号在比速度快成效缓冲区之前减低。由FlowSOM转换成成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的来生CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物隐含比对出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面转换成成的10个元簇的MST。每个节点推选一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点两组远处上色。每个节点之前的饼所示声称单个上面的隐含档次。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整锥体上面隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成成所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的大块。(e-l)相对于丰度为每个metacluster装有等分(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。深蓝色红色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一两组符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的预测号声称，Treg频亲率的减低是成效加速的标志。分级旁路(a - f)和棉花量化(g-k)来得较SP大多数人和反之亦然的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团锥体的标志性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成分离，虚拟FlowSOM小团锥体。(b) HD(白点)和SP(蓝点)两组以及NADPHSP 606(深蓝色)之前CD25+ cd127的频亲率统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路三子集的装有等分;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度后处理，箭头凸显的簇被比对为SP和HD缓冲区两者之间的不同。(j)装有等分说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组之前，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于丰度(数目)。(k)直方所示说明了每个簇的环境考量(白色)和Treg上面相对于隐含与时代背景隐含(红色);上列，闪存Treg_3;下面即刻，闪存Treg_4。时代背景与所有其他簇之前上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一两组符号秩检验

所示3 与身锥体健康献血者来得，成效加速者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个隐含上面的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的隐含热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，说明了直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon一两组符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NADPH还包括，p< 0.05(红色)NADPHSP 606和反之亦然的HD不还包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR隐含，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)串联，说明了直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一两组符号秩检验

所示4 来自加速成效的CD4+ treg细胞内管控畸变CD4+T细胞内的灵活性减小。SP两组用红色的线或和红色声称，HD两组用灰色的线或和红色声称，深蓝色的线或/红色声称NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠来生化细胞内，培训3天内顺利完成流式细胞内心法样品。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应该的treg培训(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比例。采用乙型肝炎对照(激来生的响应该细胞内不含treg)量度抑制作用比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得较测试

所示5 畸变CD4+T细胞内对加速成效的T细胞内来生化的抑制作用更脆弱。SP两组用红色的线或和红色声称，HD两组用灰色的线或和红色声称，深蓝色的线或/红色声称NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠来生化细胞内，培训3天内顺利完成流式细胞内心法(CD25反染)和细胞内因三子量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者协力培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分亲率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分亲率(c)和CD134抑制作用百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学之前的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速成效三子的来生化知觉CD4+Treg在GITR隐含之前赢取了适配和比较丰富，强调了实质性量化Treg在1型号哮喘高风险生物锥体之前的差异性的实质。

文中典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28